单细胞全基因组扩增试剂盒（PLEX）

单细胞全基因组扩增试剂盒（PLEX） 【产品名称】 通用名称：单细胞全基因组扩增试剂盒。 【包装规格】 96 rxns。 【预期用途】 用于单细胞或微量样本中 DNA 的提取和全基因组扩增步骤， 扩增产物可应用用于荧光 PCR、高通量测序、芯片等技术平台。 【检验原理】 本试剂盒采用特殊引物多重退火成环扩增技术，实现单个细胞 全基因组高稳健和可重复的扩增，获得的扩增产物可应用于 PCR 方法、芯片方法、或高通量测序方法，快速实现对单个细胞的全基 因组序列分析。 【主要组分】 试剂 24 rxns 48 rxns 96 rxns 细胞裂解缓冲液 122μL 243μL 485μL 细胞裂解酶稀释液 122μL 243μL 485μL 细胞裂解酶 5μL 10μL 20μL 预扩增缓冲液 122μL 243μL 485μL 预扩增酶 5μL 10μL 20μL 扩增缓冲液 650μL 1300μL 2600μL 扩增酶 20μL 40μL 80μL 无核酸酶水 1000μL 2000μL 4000μL 【适用仪器】 普通分子实验所需的常规仪器设备。 【储存条件及有效期】 试剂盒置于-20℃（±5℃）下条件，有效期为 12 个月。 【自备试剂】 无核酸酶水、PBS 缓冲液、纯化磁珠等。 【注意事项】 不同批次产品禁止混用。 【样本要求】 本试剂盒适用于多种类型样本的全基因组扩增，包括基因组 DNA、血细胞、组织、微生物等。 【使用前准备】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数 次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。 3. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品 时请更换枪头。 【实验步骤】 I 细胞裂解 1. 按照下表配制细胞裂解反应体系， 组分 体积 单细胞样本 2.5μL 细胞裂解缓冲液 2.5μL 细胞裂解酶稀释液 4.8μL 细胞裂解酶 0.2μL 2. 瞬时离心后，置于 PCR 仪器运行程序： 循环 温度 时间 1 75℃ 10min 1 95℃ 4min 1 22℃ ∞ II 预扩增反应 1. 按照下表配制预扩增反应体系， 组分 体积 上一步产物 10μL 预扩增缓冲液 4.8μL 预扩增酶 0.2μL 2. 瞬时离心后，置于 PCR 仪器运行程序： 循环 温度 时间 1 95℃ 2min 12 95℃ 15sec 15℃ 50sec 25℃ 40sec 35℃ 30sec 65℃ 40sec 75℃ 40sec 1 4℃ ∞ III 扩增反应 1. 按照下表配制扩增反应体系， 组分 体积 上一步产物 15μL 无核酸酶水 34.2μL 扩增缓冲液 25μL 扩增酶 0.8μL 2. 瞬时离心后，置于 PCR 仪器运行程序： 循环 温度 时间 1 95℃ 2min 14 95℃ 15sec 65℃ 1min 75℃ 1min 1 4℃ ∞ IV 产物处理 1. 保存方法：若扩增产物暂时不使用，可以保存于-20℃。 2. 纯化方法：可以使用 1~1.5×纯化磁珠进行纯化。 3. 定量方法： 可以使用 Qubit 进行产物定量，不可使用 Nanodrop 定量。 4. 产量：使用基于特异性识别双链 DNA 的荧光染料法进行测定(如 Qubit 等)：单细胞全基因组扩增产物产量≥ 1μg