可溶性果胶(WSP)含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 可溶性果胶(WSP)含量试剂盒说明书 （货号：WS4070F 分光法 48 样） 一、产品简介： 果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸等 形式广泛分布于植物果实、根茎和叶中。果胶和纤维素以及金属离子等物质相结合形成不 溶于水的原果胶，在果蔬成熟过程中转变为可溶性果胶，果实组织也变得软化、硬度下降。 本试剂盒先提取得到可溶性果胶（WSP），采用咔唑比色法测定可溶性果胶含量。果 胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应，生成紫红色物质，经光谱扫描 该物质在 530nm 处有最大吸收峰，颜色深浅与果胶含量成正比，进而得可溶性果胶含量。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 1.5mL×1 支 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 分光光度计、1mL 玻璃比色皿（1cm 光径）、水浴锅、可调式移液器、乙醇、浓硫酸、 研钵。 四、可溶性果胶(WSP)含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 取 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.2g），加 2 mL 80%乙醇，研磨匀浆，95℃水浴 25min， 取出流水冷却后，8000rpm，25℃离心 10min,弃上清，留沉淀， ② 向沉淀中加入 1 mL 80%乙醇混匀，95℃水浴 25min, 取出流水冷却后，8000rpm，25℃ 离心 10min，弃上清，留沉淀， ③ 再向沉淀中加入 1 mL 蒸馏水混匀，50℃水浴 30min,流水冷却至室温，8000rpm，25℃ 离心 10min，弃沉淀，取上清液待测。 2、上机检测： ① 分光光度计预热 30min 以上，调节波长为 530nm，蒸馏水调零； ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称 （µL） 测定管 空白管 （仅做一次） 样本 105 蒸馏水 105 浓硫酸 630 630 可用封口膜缠紧，85℃水浴 15min 后， 流水冷却至室温。 试剂一 21 21 混匀，室温（25℃）暗处反应 30min（间隔 10min 混匀一次），全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中， 于 530nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定-A 空白。 【注】：1、浓硫酸必须是分析纯级别，且不能长期开口放置，否则影响显色结果。另外浓硫酸具有 强腐蚀性，操作时需特别注意，85℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。 2、显色反应必须在暗处反应，否则颜色很快消失或者变淡，影响吸光值。本试剂盒仅供科研使用 2 3、若 A 测定管值大于 1.8，可用蒸馏水稀释样本即待检测上清液，则稀释倍数 D 需代入公 式计算；或若 A 值再零附近可增加样本取样质量 W。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 2.6619x-0.0141；，x 为标准品浓度（mg/mL），y 是△A。 2、可溶性果胶含量(mg /g 重量) =[(ΔA+0.0141) ÷2.6619×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.37×(ΔA+0.0141)÷W W---样本重量，g； V---加入提取液体积，1mL； V1---加入样本体积，0.105mL； D---稀释倍数。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（0.5mg/mL）：临用前向标准品中加入 2mL 蒸馏水（现配现用）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5. mg/mL。 也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。