叶绿体色素含量测定试剂盒,微板法

叶绿体色素含量测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 叶绿体色素含量测定试剂盒说明书 (货号：WS3160F 分光法 48 样) 一、产品简介： 叶绿体中所含色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素 a 和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包 括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其含量 多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，在 649nm 和 665nm 处测定叶绿素提取物的 吸光值，在 470nm 处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素 a 含量、 叶绿素 b 含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 试剂一 粉剂×1 瓶 4℃保存 乙醇（自备） 600mL×1 瓶 4℃保存 抽提 Buffer 配制：（体积比）乙醇：蒸馏水=95:5 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、天平、1 mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、10mL 玻璃试管、锡箔纸、无 水乙醇。 四、叶绿体色素含量的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、样本制备 （1）取新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉。 （2）称约 0.1g 剪碎，用蒸馏水洗干净，然后加入 1mL 抽提 Buffer，少量试剂一（约 50mg）， 叶绿素对光敏感，务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助 磨），然后转移至 10mL 玻璃试管。 （3）用抽提 Buffer 冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入 10mL 玻璃试管， 用抽提 Buffer 补充至 10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h，观察试 管底部组织残渣*全变白则提取*全，若组织残渣未*全变白，继续浸提至其*全变白。 2、上机检测 分别取 1mL 浸提液和 1mL 抽提 Buffer 于 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm），记为测定管和 空白管，分别于 665nm 和 649nm 和 470nm 处读取吸光值 A，△A 665=(A 测定-A 空白) 665， △A 649=(A 测定-A 空白) 649，△A 470=(A 测定-A 空白) 470。 【注】：若吸光值 A 超过 1，待检测的浸提液用抽提 buffer 稀释，计算公式乘以稀释倍数。 五、结果计算： 叶绿素 a 含量（mg/g 鲜重）=Ca× D W V 1000   叶绿素 b 含量（mg/g 鲜重）=Cb× D W V 1000   叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=CT× D W V 1000   类胡萝卜素含量（mg/g 鲜重）=Cc× D W V 1000  本试剂盒仅供科研使用 Ca=13.95×△A665–6.88×△A649 (mg/L)； Cb=24.96×△A649–7.32×△A665(mg/L)； CT=6.63×△A665+18.08×△A649(mg/L)； Cc=(1000×△A470-2.05×Ca-114.8×Cb)÷245(mg/L) =(1000×△A470-2851.304×△A649+811.7385×△A665)÷245 (mg/L)； V---代表提取液体积，10mL； D---代表稀释倍数，未稀释即为 1； W---代表样本质量，g 2