糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 糖原含量测定说明书 （货号：WS1650W 微板法 96 样） 一、产品简介： 糖原是由葡萄糖分子通过糖苷键聚合而成的高分子物质，作为重要的能源物质储存于肝 脏、肌肉和脑等重要器官。糖原的储存或代谢异常可引起多种疾病，因此测定糖原含量的 变化，对研究糖原代谢及相关疾病有着重要的意义。 采用蒽酮法：即利用强碱性提取液提取糖原，浓硫酸是糖原脱水生产糖醛衍生物，糖醛 类与蒽酮作用，在 620nm 处有最大吸收峰，再与相同方法处理的葡萄糖标准液比色定量。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×2 瓶 4℃保存 用前每瓶甩几下使粉剂落入底部，再加 10mL 浓硫酸，充分溶解混匀后使用；用 不完的试剂 4℃保存 4-5 天。 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 从标准管中称量取出 2mg 至一新 EP 管 中，再加 2mL 葡萄糖标准品溶液， 蒸馏水溶解即 再稀释 1mg/mL 的 50 倍即 0.02mg/mL 标准品备用。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。 四、糖原含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、检测液制备： 按照肝脏/肌肉样本质量（g）：提取液体积(mL)为 1：3 的比例加入提取液（如取 0.1g 组织，加 0.3mL 提取液），盖紧管盖（用封口膜封口）95℃水解 20min，室温冷却 后即为糖原水解液。 ①肝糖原检测液：在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL， 8000rpm 室温离心 5min，取上清液 100μL 至新 EP 管中，再加 900μL 蒸馏水即上清 液稀释 10 倍后作为检测液测定。 ②肌糖原检测液：在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL， 8000rpm 室温离心 5min，取上清液 200μL 至新 EP 管中，再加 200μL 蒸馏水即上清 液稀释 2 倍后作为检测液测定。 ③糖原含量低的组织样本：在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体 积约 1mL，8000rpm 室温离心 5min，取上清液作为检测液测定。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，所有试剂解冻至室温（25℃）。 ② 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用 2 【注】若 A 测定管值在零附近，可以增加测定管上样量 V 检测液（如增至 40μL），蒸 馏水相应减少，则改变后的 V 检测液代入计算公式计算。 五、结果计算： 糖原含量(mg/g)=(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×(C 标准×V 标)÷(V 检测液÷V×W)÷1.11×D =0.0018×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V 检测液÷V×W)×D V 标---0.1mL； V 检测液---0.01mL； W--取样量，g； V---提取液总体积，1mL； C 标准---标准品浓度，0.02mg/mL； D---样本测试前稀释倍数，肝糖原 D 值为 10，肌糖原 D 值为 2； 1.11---是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数。 试剂名称 （μL） 空白管 （只做一次） 标准管 （只做一次） 测定管 蒸馏水 100 90 标准液 100 检测液 10 试剂一 200 200 200 混匀，置 95℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），冷却， 取 200μL 转移至 96 孔板中，于 620nm 读取吸光值 A。