淀粉分支酶(SBE)试剂盒,微板法

淀粉分支酶(SBE)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）试剂盒说明书 （货号：WS9350W 微板法 48 样） 一、产品简介： 淀粉分支酶（SBE，EC 2.4.1.18）是参与支链淀粉合成的关键酶之一，在淀粉生物合 成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。 SBE 可使底物含量减少，从而降低底物与碘显色剂形成的在 660nm 有最大吸收峰的蓝 色复合物，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 酶活性的大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 15mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下，使试剂落入底部，先加 1mL 蒸馏水混合均匀，再徐徐加入煮沸 （95℃）的蒸馏水 5mL，继续煮沸 2min， 呈透明溶解状态，待冷却后使用。 试剂三 液体 40mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 2mL×2 支 4℃保存 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。 四、淀粉分支酶（SBE）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min， 取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 660nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本 10 10 （95℃煮沸 10min 的酶液） 试剂一 100 100 试剂二 50 50 37℃孵育 10min，沸水浴 2min，流水冷却至室温。 试剂三 400 400 试剂四 20 20 混匀，显色 10min 后，取出 200μL 至 96 孔板中，于 660nm 处读取 吸光值 A，ΔA＝A 对照管-A 测定管（每个测定管需设一个对照管）。 【注】若ΔA 差值较小，可加大样本量。则改变后的加样量 V1 需重新代入公式计算。 五、结果计算： 1、按照蛋白浓度计算： 酶活定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每毫克蛋白每降低 1％碘蓝值为本试剂盒仅供科研使用 一个酶活性单位。 SBE 活性(U/mg prot)= ΔA /A 对照管×100%÷（V1×Cpr）=100×ΔA /A 对照管÷Cpr 2、按照样本鲜重计算： 酶活定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每克组织每降低 1％碘蓝值为一 个酶活性单位。 SBE 活性(U/g 鲜重)= ΔA /A 对照管×100%÷(W×V1÷V)= 100 ×ΔA /A 对照管÷W V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.01mL； W---样本质量，g； Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 2