蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法

蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法

 蔗糖（sucrose）含量（蒽酮比色法）试剂盒说明书 （货号：G0506W 微板法 96 样） 一、产品简介： 蔗糖是光合作用的主要产物，广泛分布于植物体内，特别是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脱水缩合形成，易溶于水较难溶于乙醇。 在酸性条件下，将蔗糖水解生成果糖和葡萄糖，采用蒽酮比色法，生成的产物在 620nm 下有特征吸收峰，进而计算出蔗糖的含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 1mL×1 支 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 瓶 4℃保存 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 临用前称量取出2mg标准品至 一新EP管中，再加2mL蒸馏水 溶解即1mg/mL标准品，再用蒸 馏水稀释一倍得0.5mg/mL蔗 糖标准品溶液，备用（现配现 用，三天内用完）。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、移液器、研钵、常温离心机、乙醇、浓硫酸、蒸馏水。 四、蔗糖含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 建议：选取样本做几个梯度的稀释，选取适合本次实验的稀释倍数 D。 1、样本制备 ① 组织样本： 称取 0.1g 样本（若是干样，如烘干烟叶等可取 0.05g；若是水分充足的样本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中），冰浴匀浆，倒入 有盖离心管中，再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液终体积 定容为 1.5mL（若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜缠紧，防止液体散失，且间隔 2min 振荡混匀一次），冷却后（若有损失，可加 80%乙醇补齐至 1.5mL），12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 ② 液体样本： 澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需 12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm。 ② 调节水浴锅至 95℃，工作液的配制：临用前在一瓶试剂二中加入 2.75mL 蒸馏水后， 缓慢加入 7.25mL 浓硫酸，充分溶解（若难溶解，70℃加热溶解；剩余试剂 4℃保存 一周）。 ③ 上清液稀释：可先取 2 个样本预测，确定适合本批样本的稀释浓度 D：叶片类样 本可稀释 10 倍，含糖量高的果肉类样本可稀释 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中依次加入： 试剂（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 样本 20 标准品 20 蒸馏水 20 试剂一 10 10 10 务必混匀（可用枪吸打混匀），95℃煮沸 10min（盖紧， 防止水分散失） 工作液 180 180 180 混匀，95℃水浴 10min（封口膜缠紧，防止水分散失）， 冷却至室温后，取 200μL 转移至 96 孔板中，于 620nm 读取吸光值 A，ΔA=A 测定管-A 空白管。 【注】：如果ΔA 大于 1，需要将样本用蒸馏水稀释（严禁稀释加热反应后的混合液， 否则会出现浑浊现象），计算公式中乘以相应稀释倍数 D。 五、结果计算： 1、按照重量计算： 蔗糖含量(mg/g 重量)=(C 标准×V1)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.75×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷W×D 2、按照体积计算： 蔗糖含量(mg/mL 液体)=(C 标准×V1)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =0.5×ΔA÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---蔗糖标准品浓度，0.5mg/mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； V---加入提取液体积，1.5mL； V1---加入样本体积，0.02mL； W---样本鲜重，g。