果糖含量试剂盒(间ben二酚比色法)

果糖含量试剂盒(间ben二酚比色法)

本试剂盒仅供科研使用 1 果糖（fructose）含量（间*二酚法）试剂盒说明书 （货号：WS5050F 分光法 48 样） 一、产品简介： 果糖是一种较为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的 浆汁和蜂蜜中。本试剂盒检测果糖，是通过果糖与间*二酚反应，生成有色物质，在 480nm 下有特征吸收峰，进而求得待检测样本果糖含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 35 mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 20mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 临用前加1mL蒸馏水溶解， 即 1mg/mL 果糖溶液 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、可调式移液器、研钵、乙醇。 四、果糖含量的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 建议：可取两个样本做适当梯度的稀释（如 2-5 倍），确定适合本次实验的稀释倍数 D。 1、样本制备 ① 组织样本： 称取 0.1g 样本（若是干样，如烘干烟叶等可取 0.05g；若是水分充足的样本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中），冰浴匀浆，倒入 有盖离心管中，再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液终体积 定容为 1.5mL（若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜缠紧，防止液体散失，且间隔 2min 振荡混匀一次），冷却后（若有损失，可加 80%乙醇补齐至 1.5mL），12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 ② 液体样本： 澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需 12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 2、 上机检测 1 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入下列试剂： 试剂（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 样本 90 标准品 90 蒸馏水 90 试剂一 630 630 630 试剂二 180 180 180 混匀，95℃水浴反应 30min（可用封口膜缠紧，以防止水 分散失），冷却全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，在 480nm 分别读取吸光值 A，△A=A 测定-A 空白。本试剂盒仅供科研使用 2 【注】：如果ΔA 大于 2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数 D。 五、结果计算： 1、按样本鲜重计算： 果糖含量（mg/g 重量）=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =1.5×△A÷(A 标准-A 空白)÷W×D 2、按液体体积计算： 果糖含量（mg/mL 液体）=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白) ÷V1×D =△A÷(A 标准-A 空白) ×D C 标准---果糖标准品浓度，1mg/mL； V---加入提取液体积，1.5mL； V1---加入样本积，0.09mL； W---样本鲜重，g； D---稀释倍数。