总糖含量试剂盒,微板法

总糖含量试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 总糖含量试剂盒说明书 （货号：WS3050W 微板法 96 样） 一、产品简介： 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖 也可称为碳水化合物，包括可溶性的单糖，二糖以及不溶性的淀粉，纤维素，几丁质等。 总糖酸水解为还原糖，在碱性条件下，DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物， 在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色，经过 500nm 到 540nm 波长扫描在 500nm 处有最大吸 收峰，并且在一定的浓度范围内，还原糖含量与 500nm 吸光度成线性关系，根据标准曲线， 以此测定样品中的还原糖含量，即样品中的总糖含量。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 80mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 空瓶×1 个 4℃保存 临用前加 30mL 水，再向水中缓 慢加入 30mL 的市售盐酸（盐酸 有腐蚀性，加的过程中需缓慢谨 慎加入），混匀备用。 试剂二 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 12mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、研钵、蒸馏水、盐酸。 四、总糖含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 样品（水分充足的样本可取 0.5g）， 750μL 提取液，匀浆后加入 500μL 试 剂一，封口置于 90℃水浴中加热 30min，并且 15min 振荡一次，用冷水冷却至室温， 加入 500μL 试剂二，用蒸馏水定容至 2mL，混匀，12000rpm，25℃离心 10min，取上 清液备用。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 ② 液体样本： 取 0.1mL 液体样本加入 750μL 提取液，匀浆后加入 500μL 试剂一，封口置于 90℃水浴 中 30min，并且 15min 振荡一次，用冷水冷却至室温，加入 500μL 试剂二，用蒸馏水定 容至 2mL，混匀，12000 rpm，25℃离心 10min，取上清液备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm。 ② 提示：大多数样本总糖含量较高，为使ΔA 值在 1 以内，实验前可选取几个样本做预 测定，用蒸馏水把上清液稀释成不同浓度，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 ③ 调节水浴锅至 95℃。在 EP 管中依次加入： 试剂（μL） 测定管 空白管（仅做一次） 样本 100 蒸馏水 100 试剂三 100 100本试剂盒仅供科研使用 2 混匀，在 95℃水浴中 10min（盖紧封口，以防止水分散失）， 取出后立即过冷水冷却至室温。 蒸馏水 1000 1000 混匀，取 200μL 于 96 孔板中，500nm 读取吸光值 A， △A=A 测定-A 空白。 【注】：若△A 值大于 1.5，样本可用蒸馏水再行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式计算。 五、结果计算： 1、 标准曲线方程为 y = 7.6134x - 0.0321；x 为标准品质量（mg），y 为△A。 2、按样本鲜重计算： 总糖(mg/g 重量)=[(△A+0.0321)÷7.6134]÷(W×V1÷V)×D =2.63×(△A+0.0321)÷W×D 3、按液体体积计算： 总糖(mg/mL)=[(△A+0.0321)÷7.6134]÷[V2×V1÷V]×D =26.3×(△A+0.0321)×D V---样品提取液总体积，2mL； V1---测定时所取样品提取液的体积，0.1mL； V2---液体样品量，0.1mL； W---样本质量，g； D---稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。