可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法

可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 可溶性糖含量试剂盒说明书 (货号：WS1050W 微板法 96 样） 一、产品简介： 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。 糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮 脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色物质，其在可见光区 620nm 波长处有最大吸收， 且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。该方法用于可溶性单糖、寡糖和多糖 的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。 该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖、蔗糖、糖原、多 缩葡萄糖等），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂×2 支 4℃避光保存 试剂二 液体 5mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 工作液配制：吸取 2mL 试剂二加入到一支试剂一中，混匀并充分溶解，即得工作液。 （如难溶解，可超声溶解或者 60℃水浴溶解；剩余试剂 4℃保存一周）。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、乙醇、浓硫酸（不允许快递）、研钵。 四、可溶性糖含量的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 建议：选取样本做几个梯度的稀释，选取适合本次实验的稀释倍数 D。 ① 组织样本： 称取 0.1g 样本（若是干样，如烘干烟叶等可取 0.05g；若是水分充足的样本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中），冰浴匀浆，倒 入有盖离心管中，再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液终体 积定容为 1.5mL（若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min（封口膜缠紧，防止液体散失，且间隔 2min 振荡混匀一次），冷却后（若有损失， 可加 80%乙醇补齐至 1.5mL），12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 【注】:若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细 胞至 EP 管中，加入 1.5mL 的 80%乙醇（自备：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中）超 声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；置 50℃ 水浴 20min（封口膜缠紧，防止液体散失，且间隔 2min 振荡混匀一次），冷却后（若 有损失，可加 80%乙醇补齐至 1.5mL），12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本： 澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需 12000rpm，室温离心 10min，取上清液备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm。本试剂盒仅供科研使用 2 ② 调节水浴锅至 95-100℃，工作液用前需*全溶解。 ③ 提示：大多数样本可溶性糖含量较高，为使ΔA 值在 1 以内，实验前可选取几个样本 做预测定，用蒸馏水把上清液稀释成不同浓度，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 （强调：严禁稀释加热反应后的混合液，否则会出现浑浊现象）。 ④ 在 EP 管中依次加入： 试剂（μL） 测定管 空白管（仅做一次） 样本 25 0 蒸馏水 75 100 工作液 30 30 浓硫酸(缓慢加入) 250 250 混匀后，放入 95-100℃水浴中 10min（封口膜缠紧，防止 水分散失），冷却至室温后，取 200μL 转移至 96 孔板中， 于 620nm 读取吸光值 A，ΔA=A 测定管-A 空白管。 【注】 若ΔA 的值接近零，可增加样本加样体积 V1（如由 25μL 增至 50μL， 则蒸馏水相应减少），则改变后的 V1 代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准方程为 y = 2.0899x - 0.0103；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值ΔA。 2、按样本重量计算： 可溶性糖(mg /g 重量)=[(ΔA+0.0103)÷2.0899×V1]÷(W×V1÷V) ×D =0.718×(ΔA+0.0103)÷W×D 3、按质量分数（%）计算： 可溶性糖(%重量)=[(ΔA+0.0103)÷2.0899×V1]÷(W×V1÷V) ×10-3×100% =[0.0718×(ΔA+0.0103)÷W×D]% 4、按细菌/细胞数量计算： 可溶性糖(mg /104cell)=[(△A+0.0103)÷2.0899×V1]÷(500×V1÷V)×D =0.00144×(ΔA+0.0103)×D 5、按液体体积计算： 可溶性糖(mg/mL)=(ΔA+0.0103)÷2.0899×D=0.479×(ΔA+0.0103)×D V---样品提取液总体积，1.5mL； V1---测定时所取样本的体积，0.025mL； W---样本质量，g； 500---细胞数量，万； D---自行稀释倍数，未稀释即为 1。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的标准品（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. mg/mL。 3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。