尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法

尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿素含量（二乙酰一肟法）检测试剂盒说明书 （货号：WS1440W 微板法 96 样） 一、产品简介： 在加热和强酸条件下，尿素与二乙酰一肟及安*比林反应呈黄色，在波长460 nm 处有特征吸收峰。通过检测 生成的黄色物质在460nm处的增加量进而得出样本中尿素含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 2mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部，先加 2.4mL 蒸馏水溶解，再缓慢加 2.4mL 磷酸混匀，最后再加 4.8mL 硫酸混匀， 冷却至室温备用。 标准管 粉体 mg×2 支 4℃保存 临 用 前 每 支 加 1mL 蒸 馏 水 溶 解 （4mg/mL）， 再用蒸馏水稀释 40 倍 （1:39）成 0.1mg/mL。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、天平、移液器、离心机、蒸馏水。 四、尿素含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 0.1g 组织样本，加 1mL 的蒸馏水研磨，超声萃取 10min 后定容至 1mL，室温静置 30min，12000rpm，常温 离心 10min，上清液待测。 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min，设置温度在 37℃，设定波长到 460nm。 2 做实验前选取 2 个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 3 所有试剂解冻至室温，在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 空白管 （仅做一次） 标准管 （仅做一次） 样本 50 50 蒸馏水 20 50 标准品 50 试剂一 20 20 20 试剂二 40 40 40 40 混匀，95℃沸水浴反应 20min 蒸馏水 190 190 190 190 混匀，（若浑浊则 5000rpm 室温离心 5min 后取上清液测定）取 200μL 至 96 孔板中，于 460nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定-A 对照。 【注】：测定管的 A 值若超过 1.5，可把样本再进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。 五、结果计算： 1、按照组织质量计算： 尿素含量(mg/g)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=0.1×△A÷(A 标准-A 空白)÷W×D 尿素含量(mg/kg)=(C 标准×V1)×103×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=100×△A÷(A 标准-A 空白)÷W×D C 标准---尿素标品浓度，0.1mg/mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； 60.04---尿素分子量； W---取样质量，g； V---提取液体积，1mL； V1---加入样本体积，0.05mL。