Super Fluor 750

Super Fluor 750

计算标记比例F/P值：

对于IgG 等大多数抗体来说，摩尔吸光系数为203000，F/P值在4～9 之间是合适。

1. Super Flour 488标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和494nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A494×0.11))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例： 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A494×稀释倍数/(71000×蛋白摩尔浓度)

2. Super Flour 555标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和555nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A555×0.08))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例： 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A555×稀释倍数/(150000×蛋白摩尔浓度)

3. Super Flour 647标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和650nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A650×0.03))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例： 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A650×稀释倍数/(239000×蛋白摩尔浓度)

4. Super Flour 680标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和680nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A650×0.05))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例： 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A650×稀释倍数/(184000×蛋白摩尔浓度)

5. Super Flour 750标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和750nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A750×0.04))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例： 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A750×稀释倍数/(240000×蛋白摩尔浓度)