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其实ECL超敏发光液操作起来没那么难!
更新时间:2022-03-14      阅读:730
   ECL超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
  ECL超敏发光液的操作方法
  1.按每平方厘米膜面积用配置发光液:根据发光液的需要量,取等体积A液和B液,混匀后避光保存备用;该发光液必须现配现用。
  2.取出膜,平放在干净的保鲜膜上,膜的正面(蛋白质面)朝上,在膜的中央加适量的配置好的发光液,溶液向四周迅速扩散,覆盖所有膜面。室温保温5分钟左右,在此过程中请仔细观察信号的出现。注意:如果信号强,在暗室中能很快看到阳性信号出现。
  3.待信号出现且稳定后,用镊子夹起膜,除去多余的发光液,平放在干净的保鲜膜上,膜的正面(蛋白质面)朝上,在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜,除去保鲜膜与转移膜之间的空气泡,请务必保证保鲜膜是干净的,不被其他杂物或液体污染。
  4.在暗室中,将膜的正面对着X-光片,放入暗盒。第一次曝光时间在1分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强弱自行决定),立即按要求对X-光片进行显影和定影,确定最佳曝光时间。曝光时间从数秒到数小时不等;特别弱的过夜曝光也可。
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