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电泳及RNA定量检测试剂盒的转膜操作步骤,一般人我不告诉他
更新时间:2019-04-30      阅读:1498
 电泳及RNA定量检测试剂盒的说明:  
    1.电泳及RNA定量检测试剂盒的保存:部分试剂保存于-20℃,部分试剂保存于2-8℃,具体以标签上的标示为准。  
    2.浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。  
    3.刚开启的酶联板孔中可能会含有少量水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。  
    4.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。  
    5.所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。  
电泳及RNA定量检测试剂盒的转膜操作步骤:  
    电泳及RNA定量检测试剂盒转膜前的RNA琼脂糖凝胶电泳参照RNA分离中的电泳方法,根据需要选用适当的分子量。 
    1.在一个标准变性凝胶电泳完成后,凝胶用DMPC-H2O淋洗,以除去甲醛,然后用DMPC-H2O稀释)中浸泡。  
    2.构建转移平台:在塑料盒上横放一块玻璃板,玻璃板应比塑料盒长,但比塑料盒窄。剪一块与盒子等宽但长度是盒子长度2倍的滤纸,将其横放在玻璃板上,滤纸两头垂入盘中,用浸湿滤纸,并向盘中加入足量。  
    3.用锋利的小刀将凝胶边缘无用部分修去,并在靠加样孔的一放左上角切去一小块作为凝胶方位的记号。将凝胶置于平台中央,用玻棒滚动除去气泡,然后用石蜡膜封住凝胶四周边缘,避免覆盖样品部位。  
    4.剪一片与凝胶暴露面同样大小的尼龙膜,在无RNase的水中浸泡5min.,然后将其放置在凝胶上面,膜的一条边缘应刚好重叠覆盖于加样孔的边缘。膜置于凝胶表面后即不应轻易挪动,膜与凝胶之间不应留有气泡。  
    5.取两张与尼龙膜同样大小的滤纸,电泳及RNA定量检测试剂盒用浸湿后置于膜的上方,用玻棒赶出气泡。切一叠略小于滤纸的纸巾,将其置于滤纸上方,在纸巾上平放一玻璃板,然后在玻璃板上压一重物,室温下转膜4~6小时或4℃过夜。  
    在转膜过程中,要保证塑料盘中有足够的,当纸巾浸湿后,要及时更换。  
    6.拆卸转膜装置,翻转凝胶和膜使凝胶的一面朝上,置于一张干的滤纸上,用软铅笔在膜上标记凝胶加样孔的位置。  
    7.取下凝胶,用洗膜,再置于两张干滤纸上使膜晾干。
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